МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА МУЛЬТИТАРГЕТНОЙ ОДНОНУКЛЕОТИДНОЙ ЭЛОНГАЦИИ И ФРАГМЕНТНОГО АНАЛИЗА

DOI: https://doi.org/10.29296/24999490-2020-03-06

А.А. Мусаелян, В.Д. Назаров, кандидат медицинских наук, С.В. Лапин, кандидат медицинских наук, И.В. Чистяков, кандидат медицинских наук, И.В. Комаров, кандидат медицинских наук, О.Ю. Ткаченко, М.В. Согоян, Е.В. Бердник, А.В. Мазинг, кандидат медицинских наук, В.Л. Эмануэль, доктор медицинских наук, профессор, А.Л. Акопов, доктор медицинских наук, профессор, С.В. Орлов, член-корреспондент РАН, профессор, С.Ф. Багненко, академик РАН, профессор ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Российская Федерация, 197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, д. 6–8 E-mail: a.musaelyan8@gmail.com

Введение. Рак легкого – наиболее частая причина смерти при злокачественных новообразованиях. Преобладающим типом является немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), при лечении которого активно применяется таргетная терапия тирозин- киназными ингибиторами (ТКИ) EGFR, а также комбинация BRAF/MEK ингибиторов. Показанием для данной терапии яв- ляется генотипирование опухолевого материала для обнаружения предиктивных маркеров, таких как мутации в генах EGFR, KRAS, BRAF и HER2. Одним из подходов к быстрому и комплексному выявлению аббераций в генах интереса является исполь- зование методов мультитаргетной однонуклеотидной элонгации (МОЭ) и фрагментного анализа (ФА), обладающих высокой чувствительностью. Цель. Определение клинико-морфологических характеристик у пациентов с НМКРЛ с наличием драйверных мутаций в ге- нах EGFR, KRAS, BRAF и HER2. Материал и методы. На базе ПСПбГМУ им. И.П. Павлова был организован криобанк биологических материалов, взятых у пациентов с НМКРЛ. Для генотипирования центральных участков опухолевых образцов у 60 пациентов с НМКРЛ использова- лись методы МОЭ и ФА. Результаты. Мутации в гене EGFR обнаружены исключительно у пациентов с аденокарциномой легкого (p=0,0008) с ча- стотой 31%. Данные аберрации статистически значимо ассоциированы с женским полом (p=0,0002) и отсутствием статуса курения (p=0,0007). Соотношение делеции в 19 экзоне к точечной мутации L858R составило 2,5:1. Распространенность минор- ных мутаций у EGFR-положительных пациентов достигала 22,2%. При этом у одного пациента было выявлено сосуществова- ние минорных мутаций G719S и S768I. Причиной приобретенной резистентности к ТКИ EGFR 1-го поколения у пациента яви- лась делеция в 19 экзоне-T790M в гене EGFR, возникшая на фоне лечения. Аберрации в гене KRAS обнаружены у 10% пациентов мужского пола с НМКРЛ, ранее куривших или продолжающих курить. Мутация V600E в гене BRAF и инсерции в гене HER2 не обнаружены. Заключение. Применение комплексного методического подхода позволяет с высокой точностью определять клинически значимые аберрации в гене EGFR, KRAS, BRAF и HER2 у пациентов c НМКРЛ в соответствии с клиническими рекоменда- циями
Ключевые слова: 
таргетная терапия, немелкоклеточный рак легкого, EGFR, KRAS, HER2

Список литературы: 
  1. Bray F., Jacques Ferlay, Isabelle Soerjoma- taram, Siegel R.L., Torre L.A., Jemal A. Global Cancer Statistics 2018: GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Coun- tries. CA Cancer J. Clin. 2018. https://doi. org/10.3322/caac.21492.
  2. Arora R., Krishnan V. Selective Targeting of the L858R Mutation (EGFR) in Non- Small Cell Lung Cancer: A Mechanism for Advancing Targeted Chemotherapy. Front Oncol. 2017; 7. https://doi.org/10.3389/ fonc.2017.00104.
  3. Sokolenko A.P., Imyanitov E.N. Molecular Diagnostics in Clinical Oncology. Front Mol. Biosci. 2018; 5: 76. https://doi.org/10.3389/ fmolb.2018.00076.
  4. Yang Y., Shen X., Li R., Shen J., Zhang H., Yu L. et al. The detection and significance of EGFR and BRAF in cell-free DNA of peripheral blood in NSCLC. Oncotarget. 2017. https://doi.org/10.18632/onco- target.17937.
  5. Лактионов К. К., Артамонова Е. В., Бредер В. В., Горбунова В. А., Моисеенко Ф. В., Реутова Е. В. исоавт. Практические рекомендации по лекарственному лечению немелкоклеточного рака легкого.Злокачественные опухоли: Практические рекомендации RUSSCO #3s2. 2018; 8:30–46.[Laktionov K.K., Artamonova E.V., Breder V.V., Gorbunova V.A., Moiseenko F.V., Reutova E.V. et al. Practical guidelines for drug treatment of non-small cell lung cancer. Malignant tumors: Practicalguidelines RUSSCO #3s2. 2018; 8: 30–46 (in Russian)]
  6. Lewandowska M.A., Czubak K., Klonowska K., Jozwicki W., Kowalewski J., KozlowskiP. The use of a two-tiered testing strategy for the simultaneous detection of small EGFR mutations and EGFR amplification in lung cancer. PLoS One. 2015. https://doi. org/10.1371/journal.pone.0117983.
  7. Ettinger D.S., Aisner D.L., Wood D.E., Akerley W., Bauman J., Chang J.Y. et al. NCCN Guidelines Insights: Non–Small Cell Lung Cancer, Version 5.2018. J. Natl Compr Can- cer Netw. 2018. https://doi.org/10.6004/ jnccn.2018.0062.
  8. O’Kane G.M., Bradbury P.A., Feld R., Leighl N.B., Liu G., Pisters K.M. et al. Uncommon EGFR mutations in advanced non-small cell lung cancer. Lung Cancer. 2017. https:// doi.org/10.1016/j.lungcan.2017.04.016.
  9. Lavdovskaia E.D., Iyevleva A.G., Sokolenko A.P., Mitiushkina N.V., Preobrazhenskaya E.V., Tiurin V.I. et al. EGFR T790M Mutationin TKI-Naive Clinical Samples: Frequency, Tissue Mosaicism, Predictive Value and Awareness on Artifacts. Oncol Res Treat. 2018. https://doi.org/10.1159/000491441.
  10. Maus M.K.H., Grimminger P.P., Mack P.C., Astrow S.H., Stephens C., Zeger G. et al. KRAS mutations in non-small-cell lung can- cer and colorectal cancer: Implications for EGFR-targeted therapies. Lung Cancer. 2014; 83: 163–7. https://doi.org/10.1016/j. lungcan.2013.11.010.
  11. Del Re M., Rofi E., Restante G., Crucitta S., Arrigoni E., Fogli S. et al. Implications of KRAS mutations in acquired resistance totreatment in NSCLC. Oncotarget. 2018. htt- ps://doi.org/10.18632/oncotarget.23553.
  12. Román M., Baraibar I., López I., Nadal E., Rolfo C., Vicent S. et al. KRAS oncogene in non-small cell lung cancer: Clinical perspectives on the treatment of an old target. Mol Cancer 2018. https://doi. org/10.1186/s12943-018-0789-x.
  13. Planchard D., Popat S., Kerr K., Novello S., Smit E.F., Faivre-Finn C. et al. Metastatic non-small cell lung cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treat- ment and follow-up†. Ann Oncol. 2018. https://doi.org/10.1093/annonc/mdy275.
  14. Mazéres J., Barlesi F., Filleron T., Besse B., Monnet I., Beau-Faller M. et al. Lung can- cer patients with HER2 mutations treated with chemotherapy and HER2-targeted drugs: Results from the European EUHER2 cohort. Ann Oncol. 2016. https://doi. org/10.1093/annonc/mdv573.
  15. Мусаелян А.А., Чистяков И.В., Назаров В.Д., Лапин С.В., Согоян М.В., Хальчицкий С.Е., Эмануэль В.Л., Лобачевская Т.В., Акопов А.Л.Оптимизация метода мультитаргетной однонуклео-тидной элонгации для определения соматических мутаций при злокачественных новообразованиях.44–9. https://doi.org/10.29296/24999490-2019-02-06[Musaelyan A.A., Chistyakov I.V., Nazarov V.D., Lapin S.V., Sogoyan M.V., Khalchitsky S.E., Emanuel W.L., Lobachevskaya T.W., Akopov A.L. Optimization of the method of the multi-target single-base elonga- tion for the detection of somatic muta- tions in malignancies. Molekulyarnayameditsina. 2019; 17 (2): 44–9 https://doi. org/10.29296/24999490-2019-02-06 (inRussian)]
  16. Su Z., Dias-Santagata D., Duke M., Hutchinson K., Lin Y.L., Borger D.R. et al. A platform for rapid detection of multiple oncogenic mutations with relevanceto targeted therapy in non-small-cell lung cancer. J. Mol. Diagnostics. 2011; 13: 74–84. https://doi.org/10.1016/j. jmoldx.2010.11.010.
  17. Magnin S., Viel E., Baraquin A., Valmary- Degano S., Kantelip B., Pretet J.-L. et al.A multiplex SNaPshot assay as a rapid method for detecting KRAS and BRAF mu- tations in advanced colorectal cancers. J. Mol. Diagn. 2011. https://doi.org/10.1016/j. jmoldx.2011.05.010.
  18. Imyanitov N.E., Demidova A.I., Gordiev M., Filipenko M., Kekeyeva V.T., Moliaka K.Y. et al. Distribution of EGFR Mutations in 10,607 Russian Patients with Lung Cancer. 2016; 20. https://doi.org/10.1007/s40291-016- 0213-4.
  19. Chiu C.H., Yang C.T., Shih J.Y., Huang M.S., Su W.C., Lai R.S. et al. Epidermal growth factor receptor tyrosine Kinase inhibitor treatment response in advanced lung ad- enocarcinomas with G719X/L861Q/S768I mutations. J. Thorac. Oncol. 2015. https:// doi.org/10.1097/JTO.0000000000000504.
  20. Lim S.M., Syn N.L., Cho B.C., Soo R.A. Ac- quired resistance to EGFR targeted therapy in non-small cell lung cancer: Mecha- nisms and therapeutic strategies. Cancer Treat Rev. 2018. https://doi.org/10.1016/j. ctrv.2018.02.006.