РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ВАЛЬПРОЕВОЙ КИСЛОТЫ И 1,3,4-ТИАДИАЗОЛА В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ КРЫС

DOI: https://doi.org/10.29296/24999490-2020-04-06

А.С. Малыгин, Н.С. Попов, кандидат фармацевтических наук, М.А. Демидова, доктор медицинских наук, профессор, Н.А. Шатохина, кандидат медицинских наук, доцент ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России, Российская Федерация, 170100, Тверь, Советская, д. 4 E-mail: dr.a.s.m@yandex.ru

Введение. Для оценки фармакокинетических параметров новых лекарственных средств необходима разработка аналитических методов определения их содержания в биологических объектах. Цель исследования. Разработка и валидация методики высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-детектированием нового производного вальпроевой кислоты и 1,3,4-тиадиазола в головном мозге крыс. Методы. Объектом исследования явился новый антиконвульсант N-(5-этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид (вальпразоламид). Определение вальпразоламида осуществляли ВЭЖХ-масс-спектрометрическим методом. Оценивали селективность, перенос пробы, линейность, правильность, прецизионность, матричный эффект, степень извлечения вальпразоламида. Результаты. Разработана методика ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения вальпразоламида в гомогенатах головного мозга крыс (аналитическая колонка Zorbax Eclipsi plus C18 4 мкм 2,0×150 мм, температура 30°С; подвижная фаза – ацетонитрил и вода деионизированная со следующим профилем градиента: 0–1-я минута – 10% раствор ацетонитрила; 1–5-я минута – линейное повышение концентрации ацетонитрила до 90%; 5–6-я минута – изократический участок с концентрацией ацетонитрила 90%; 6–10-я минута – кондиционирование колонки 10% ацетонитрилом; скорость потока подвижной фазы – 0,6 мл/мин; объем вводимой пробы – 10 мкл; общее время элюирования – 10 мин, масс-детектирование при отрицательной поляризации). Значение MRM-перехода вальпразоламида составило m/z 254,0 → m/z 167,1. Заключение. Аналитический диапазон методики составляет 1–1000 нг/мл. Разработанная методика является селективной, точной, прецизионной и линейной, по всем параметрам соответствует требованиям по валидации биоаналитических методик.
Ключевые слова: 
3

Список литературы: 
  1. Singh A., Trevick S. The epidemiology of global epilepsy. Neurol. Clin. 2016; 34 (4): 837–47. https://doi.org/10.1016/j.ncl.2016.06.015
  2. Thijs R.D., Surges R., O’Brain T.J., Sander J.W. Epilepsy in adults. Lancet. 2019; 16 (393): 689–701. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(18)32596-0
  3. N-(5-Этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид, обладающий противоэпилептической и обезболивающей активностями. Н.К. Желтухин, М.А. Демидова, А.В. Коротконожкин, Н.С. Попов, С.Я. Скачилова, Н.П. Садчикова, А.С. Малыгин; заявитель и патентообладатель ОАО ВНЦ БАВ. 267288; заявл. 13.03.2018; опубл. 20.11.2018, Бюл. №32. 1 с. [N- (5-Etil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-propilpentanamid, obladayushchiy protivoepilepticheskoy i obezbolivayushchey aktivnostyami. N.K. Zheltukhin, M.A. Demidova, A.V. Korotkonozhkin, N.S.Popov, S.YA. Skachilova, N.P. Sadchikova, A.S.Malygin; zayavitel’ i patentoobladatel’ OAO VNTS BAV. 267288; zayavl. 13.03.2018; opubl. 20.11.2018, Byul. №32. 1 s. (in Russian)]
  4. Малыгин А.С. Оценка острой токсичности и нейротоксичности нового амидного производного вальпроевой кислоты и 1,3,4-тиадиазола. Медицина. 2019; 3: 37–46. [Malygin A.S. Evaluation of acute toxicity and neurotoxicity of a new amide derivative of valproic acid and 1,3,4-thiadiazole. Meditsina. 2019; 3: 37–46 (in Russian)]
  5. Миронов А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М.: Гриф и К., 2012; 944. [Mironov A.N. Guidelines for preclinical studies of drugs. M.: Grif and K., 2012; 944 (in Russian)]
  6. Приказ МЗ РФ от 01.04.2016 №199н «Правила надлежащей лабораторной практики».
  7. [Prikaz MZ RF ot 01.04.2016 №199n «Rules of Good Laboratory Practice» (in Russian)]
  8. Береговых В.В. Валидация аналитических методик для производителей лекарств. Типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств. М.: Литтерра, 2008; 18–65. [Beregovykh V.V. Validation of analytical techniques for drug manufacturers. Typical management of a pharmaceutical manufacturing enterprise. M.: Litterra, 2008; 18–65 (in Russian)]
  9. Guidance for Industry: Bioanalytical method validation. US Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER), US Government Printing Office, Washington, DC. 2001.
  10. Guidance on the Investigation of Bioequivalence. European Medicines Agency (EMA). Committee for Medicinal Products of Human Use (CHMP). 2010.