СТАНДАРТИЗАЦИЯ МЕТОДА МУЛЬТИТАРГЕТНОЙ ОДНОНУКЛЕОТИДНОЙ ЭЛОНГАЦИИ ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

DOI: https://doi.org/10.29296/24999490-2020-06-05

П.А. Федорова, В.Д. Назаров, А.А. Мусаелян, С.В. Лапин, М.Е. Борискова, У.В. Фарафонова, В.Л. Эмануэль ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Российская Федерация, 197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, д. 6–8 E-mail: nazarov19932@mail.ru

Введение. Рак щитовидной железы (РЩЖ) занимает первое место по распространенности среди злокачественных новообразований органов эндокринной системы. Группу наиболее сложных для диагностики случаев составляют новообразования с цитологическими категориями Bethesda III–V. Молекулярно-генетическое тестирование может стать инструментом, дополняющим рутинные цитопатологические исследования и оптимизировать диагностику РЩЖ. Цель исследования. Разработка панели для обнаружения точечных мутаций в цитологическом материале новообразования щитовидной железы с помощью метода МОЭ. Материалы и методы. В исследование были включены 52 пациента с новообразованием щитовидной железы. Пациенты были разделены на группы по принадлежности к IV–VI категории по классификации Bethesda. Первую группу составляли 24 человека, вторую – 7, третью – 21 человек. Цитологический материал представлен смывом с иглы тонкоигольной аспирационной биопсии. Генетическое тестирование проводилось с помощью технологии мультитаргетной однонуклеотидной элонгации (МОЭ). Было создано 3 панели с наиболее распространенными мутациями при РЩЖ: мутации в генах BRAF, KRAS, NRAS, HRAS. Для 25 пациентов получены результаты постоперационного гистологического исследования: 11 образцов папиллярного РЩЖ, 9 образцов фолликулярного варианта папиллярного рака и 5 – фолликулярной аденомы. Результаты. С помощью метода МОЭ удалось детектировать мутации в цитологическом материале, их доля составила 39%, из них BRAFV600E обнаружена в 29% образцов, а мутация NRASQ61R – в 10%. Для верификации метода были использованы положительные и отрицательные контрольные образцы, подтвержденные методом ПЦР. Во всех пробах наблюдалось полное соответствие полученных результатов при молекулярно-генетическом исследовании методом МОЭ. Заключение. МОЭ является высокочувствительным методом, позволяющим в относительно короткие сроки осуществить комплексный подход к поиску мутаций, что особенно важно при диагностике РЩЖ.
Ключевые слова: 
соматические мутации

Список литературы: 
  1. Hay I.D., Thompson G.B., Grant C.S., Bergstralh E.J., Dvorak C.E., Gorman C.A. et al. Papillary thyroid carcinoma managed at the Mayo Clinic during six decades (1940–1999): Temporal trends in initial therapy and long-term outcome in 2444 consecutively treated patients. World J. Surg. 2002; 26 (8): 879–85. https://doi.org/10.1007/s00268-002-6612-1
  2. Saiselet M., Floor S., Tarabichi M., Dom G., Hеbrant A., van Staveren W.C.G. et al. Thyroid cancer cell lines: An overview. Front Endocrinol (Lausanne). 2012; 3: 1–9. https://doi.org/10.3389/fendo.2012.00133
  3. Haugen B.R., Alexander E.K., Bible K.C., Doherty G.M., Mandel S.J., Nikiforov Y.E. et al. 2015 American Thyroid Association Management Guidelines for Adult Patients with Thyroid Nodules and Differentiated Thyroid Cancer: The American Thyroid Association Guidelines Task Force on Thyroid Nodules and Differentiated Thyroid Cancer. Thyroid [Internet]. 2016; 26 (1): 1–133. https://doi.org/10.1089/thy.2015.0020
  4. Xing M. Clinical utility of RAS mutations in thyroid cancer: A blurred picture now emerging clearer. BMC Medicine. 2016. https://doi.org/10.1089/thy.2015.0020
  5. Fernández-Ramirez F., Hurtado-López L.M., López M.A., Martinez-Peñafiel E., Herrera-González N.E., Kameyama L. et al. BRAF 1799T>A Mutation Frequency in Mexican Mestizo Patients with Papillary Thyroid Cancer. Biomed Res Int. 2018; 2018. https://doi.org/10.1155/2018/2582179
  6. Ferrari S.M., Fallahi P., Ruffilli I., Elia G., Ragusa F., Paparo S.R. et al. Molecular testing in the diagnosis of differentiated thyroid carcinomas. Gland Surg. 2018; 7 (S1): 19–29. https://doi.org/10.21037/gs.2017.11.07
  7. Kim W.W., Ha T.K., Bae S.K. Clinical implications of the BRAF mutation in papillary thyroid carcinoma and chronic lymphocytic thyroiditis. J. Otolaryngol – Head Neck Surg. 2018; 47 (1): 1–6. https://doi.org/10.1186/s40463-017-0247-6
  8. Абросимов А.Ю. Инкапсулированные фолликулярные опухоли щитовидной железы неопределенного злокачественного потенциала в новой международной гистологической классификации. Клиническая и экспериментальная тиреоидология, 2018; 13 (4): 9–15. https://doi.org/10.14341/ket9481 [Abrosimov AY. Encapsulated follicular thyroid tumors of uncertain malignant potential in the new international histological classification. Clin. Exp. Thyroidol. 2018; 13 (4): 9–15. https://doi.org/10.14341/ket9481 (in Russian)]
  9. Боголюбова А.В., Абросимов А.Ю., Селиванова Л.С., Белоусов П.В. Гистологическая и молекулярно-генетическая характеристика клинически агрессивных вариантов папиллярного рака щитовидной железы. 2019; 81 (1): 46–51. https://doi.org/10.17116/patol20198101146. [Bogolyubova A.V., Abrosimov A.Y, Selivanova L.S, Belousov P.V. Histopathological and molecular genetic characteristics of clinically aggressive variants of papillary thyroid carcinoma. Arkh Patol. 2019; 81 (1): 46–51. https://doi.org/10.17116/patol20198101146 (in Russian)]
  10. Мусаелян А.А., Чистяков И.В., Назаров В.Д., Лапин С.В., Согоян М.В., Хальчицкий С.Е., Эмануэль В.Л., Лобачевская Т.В. Акопов А.Л. Оптимизация метода мультитаргетной однонуклеотидной элонгации для определния соматических мутаций при злокачественных ноовобразованиях. Молекулярная медицина. 2019; 2 (17). https://doi.org/10.29296/24999490-2019-02-06 [Musaelyan A.A., Chistyakov I.V., Nazarov V.D., Lapin S.V., Sogoyan M.V., Khalchitsky S.E., Emanuel V.L., Lobachevskaya T.V., Akopov A.L. Optimization of the method of the multi-target single-base elongation for the detection of somatic mutations in malignancies. Molekulyarnaya Meditsina. 2019; 2 (17). https://doi.org/10.29296/24999490-2019-02-06 (in Russian)]
  11. Под ред. Каприна А.Д., Старинского В.В., Петровой Г.В. Злокачественные новообразования в россии в 2017 году (заболеваемость и смертность). 2018. [Edited by Kaprin A.D., Starinskiy V.V., Petrova G.V. Zlokachestvennyie novoobrazovaniya v rossii v 2017 godu (zabolevaemost’ i smertnost’). 2018 (in Russian)]
  12. Xie H., Wei B., Shen H., Gao Y., Wang L., Liu H. BRAF mutation in papillary thyroid carcinoma (PTC) and its association with clinicopathological features and systemic inflammation response index (SIRI). Am. J. Transl Res. 2018; 10 (8): 2726–36.
  13. Nikiforov Y.E. Role of Molecular Markers in Thyroid Nodule Management: Then and Now. Endocr Pract [Internet]. 2017; (aop): EP171805.RA. https://doi.org/10.4158/EP171805.RA
  14. Strickland K.C., Eszlinger M., Paschke R., Angell T.E., Alexander E.K., Marqusee E. et al. Molecular Testing of Nodules with a Suspicious or Malignant Cytologic Diagnosis in the Setting of Non-Invasive Follicular Thyroid Neoplasm with Papillary-Like Nuclear Features (NIFTP). Endocr Pathol. 2018; 29 (1): 68–74. https://doi.org/10.1007/s12022-018-9515-x