Индукция апоптоза клеток рака предстательной железы экстрактом бадяги речной

Введение. Рак предстательной железы (РПЖ) на сегодняшний день является самым часто диагностируемым злокачественным новообразованием органов мочевой системы. Патогенез и молекулярные механизмы РПЖ остаются понятыми неполностью. Имеются сообщения о наличии в экстрактах нескольких видов морских и пресноводных губок биоактивных метаболитов, снижающих пролиферативную активность раковых клеток, в частности, клеток РПЖ. Целью исследования явилась оценка влияния экстракта бадяги речной (ЭБР) на жизнеспособность и апоптоз клеток РПЖ LNCAP клона ФСК (ЕСАСС 89110211) и связанный с этим механизм. Материал и методы. В работе использованы ЭБР (Ephydatia fluviatilis), клетки LNCAP клона ФСК (ЕСАСС 89110211). Анализ клеточной пролиферации проводили стандартным МТТ тестом, анализ апоптоза – методом проточной цитометрии с использованием проточного цитофлуориметра Attune® NxT. Набор для обнаружения апоптоза ANNEXIN V-FITC APOPTOSIS DETECTION KIT I (BD PharmingemTM, США) использован для дальнейшего подтверждения апоптоза, чтобы определить влияние ЭБР на сигнальный путь, участвующий в этом исследовании. Проапоптотические и антиапоптотические белки в клетках LNCAP оценивали методом вестерн-блотт анализа. Результаты и обсуждение. Предварительное исследование эффекта ЭБР на пролиферацию клеток LNCAP показало, что ЭБР проявил максимальный эффект торможения роста на клетки LNCAP, начиная со 2-х суток инкубации. Дальнейший эксперимент преследовал цель выяснения зависимости ингибирующего эффекта от концентрации ЭБР в среде культивирования. Показана сильная взаимосвязь доза-ответ ЭБР и жизнеспособности клеток LNCAP. Однако показано, что ЭБР вызывал небольшое достоверное увеличение жизнеспособности клеток между 0 мкг/мл (контроль) и 6,25 мкг/мл. Такую реакцию можно объяснить известным эффектом гормезиса. При оценке профиля безопасности ЭБР показан индекс селективности 7,24. Отмечено, что именно апоптоз способствовал снижению жизнеспособности клеток РПЖ линии LNCAP после воздействия ЭБР. Существует прямая зависимость уровня апоптоза от концентрации ЭБР в культуральной жидкости. Вестерн-блоттинг клеток LNCAP, обработанных ЭБР различных концентраций (0, 50, 100 и 200 мг/мл) для оценки экспрессии белков Bcl-2, Bax показал, что уровень Bax растет, а Bcl-2 – падает. Заключение. ЭБР оказывает ингибирующее влияние на рост и жизнеспособность клеток РПЖ, вызывая их апоптоз. Обработка ЭБР также увеличивала соотношение экспрессии Bax/Bcl2, что указывает на участие митохондриально-опосредованного внутреннего апоптотического пути.