МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАЗОФИЛОВ КРЫСЫ ЛИНИИ RBL-2H3 ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ДЕГРАНУЛЯЦИИ

DOI: https://doi.org/None

М.А. Горячева, К.Л. Крышень, кандидат биологических наук, А.Е. Кательникова, Е.Г. Акулова, М.Н. Макарова, доктор медицинских наук, В.Г. Макаров, доктор медицинских наук, профессор Научно-производственное объединение «Дом Фармации», Российская Федерация, Санкт-Петербург, 188663, г.п. Кузьмоловский, д. б/н, корп. 245 E-mail: kryshen@bk.ru

Введение. Высвобождение медиаторов из тучных клеток или базофилов является ключевым событием для множества острых аллергических и воспалительных процессов. Клеточная линия базофильной лейкемии крысы RBL-2H3 широко используется в качестве модели для изучения дегрануляции тучных клеток. Цель исследования. Отработка условий (подбор оптимального индуктора, времени экпозиции и концентраций) индукции дегрануляции клеточной линии базофильной лейкемии крысы RBL-2H3. Материал и методы. Клетки стимулировали известными индукторами: веществом 48/80 и кальциевым ионофором А23187 в широком диапазоне концентраций. Проводили инкубацию клеток с индукторами 10, 25 и 45 мин. Дегрануляцию оценивали по активности фермента β-гексозаминидазы в супернатантах и клеточных лизатах. Результаты. Наблюдали различия в степени дегрануляции в зависимости от концентрации и времени инкубации с тестируемыми индукторами. Зависимость от концентрации имела характерную колоколообразную форму для обоих веществ. Заключение. В целом индукция дегрануляции кальциевым ионофором А23187 была более эффективной и приводила к более высокому (по сравнению с веществом 48/80) проценту чистого выброса фермента β-гексозаминидазы. Обсуждены механизмы действия вещества 48/80 и ионофора А23187 в качестве индуктора дегрануляции тучных клеток.
Ключевые слова: 
тучные клетки, RBL-2H3, дегрануляция, вещество 48/80, кальциевый ионофор А23187

Список литературы: 
  1. Galli S.J., Nakae S., Tsai M. Mast cells in the development of adaptive immune responses. Nat. Immunol. 2005; 6: 135–42.
  2. Theoharides S.T., Valent P., Akin C. Mast cells, mastocytosis and related disorders. The New England journal of medicine. 2015; 9: 163.
  3. Rohlich P., Anderson P., Uvnas B. Electron microscope observations on compounds 48–80-induced degranulation in rat mast cells: Evidence for sequential exocytosis of storage granules. J. Cell Biol. 1971; 51: 465–83.
  4. Rivera J., Gilfillan A. Molecular regulation of mast cell activation. J. Allergy Clin. Immunol. 2006; 117: 1214–25.
  5. Passante E., Frankish N. The RBL-2H3 cell line: its provenance and suitability as a model for the mast cell. Inflamm. Res. 2009; 58: 737–45.
  6. Ishida M., Nishi K., Watanabe H., Sugahara T. Inhibitory effect of aqueous spinach extract on degranulation of RBL-2H3 cells. Food Chem. 2013; 136 (2): 322–7.
  7. Sinniah A., Yazid S., Perretti M., Solito E., Flower R.J. The role of the Annexin-A1/FPR2 system in the regulation of mast cell degranulation provoked by compound 48/80 and in the inhibitory action of nedocromil. Int Immunopharmacol. 2016; 32: 87–95.
  8. Aronson N.N., Kuranda M.J. Lysosomal degradation of Asn-linked glycoproteins. FASEB J. 1989; 3 (14): 2615–22.
  9. Schwartz L.B., Austen K.F., Wasserman S.I. Immunologic release of betahexosaminidase and beta glucuronidase from purified rat serosal mast cells. J. Immunol. 1979; 123: 1445–50.
  10. Current Protocols in Cell Biology Assays for Regulated Exocytosis of Mast Cell Granules. Unit. 15.11.1-15.11.18. Wiley Intersciences. 2006.
  11. Imai A., Ishizuka Y., Nakashima S., Nozawa Y. Differential activation of membrane phospholipid turnover by compound 48/80 and ionophore A23187 in rat mast cells. Arch Biochem Biophys. 1984; 232 (1): 259–68.
  12. Gilfillan A.M., Tkaczyk С. Integrated signalling pathways for mast-cell activation. Nature reviews. Immunology. 2006; 6: 218–30.
  13. Aketani S., Teshima R., Umezawa Y., Sawada J. Correlation between cytosolic calcium concentration and degranulation in RBL-2H3 cells in the presence of various concentrations of antigen-specific IgEs. Immunol Lett. 2001; 75 (3): 185–9.
  14. Dedkova E.N., Sigova A.A., Zinchenko V.P. Mechanism of action of calcium ionophores on intact cells: ionophore-resistant cells. Membr Cell. Biol. 2000; 13: 357–68.
  15. Tanaka T., Kohno T., Kinoshita S., Mukai H., Itoh H., Ohya M., et al. Alpha helix content of G protein alpha subunit is decreased upon activation by receptor mimetics. J. Biol. Chem. 1998; 273: 3247–52.
  16. Tomita U., Inanobe A., Kobayashi I., Takahashi K., Ui M., Katada T. Direct interactions of mastoparan and compound 48/80 with GTP-binding proteins. J Biochem. 1991; 109: 184–9.
  17. Bezprozvanny I., Watras J., Ehrlich B. Bell-shaped calcium-response curves of Ins(1,4,5)P3- and calcium-gated channels from endoplasmic reticulum of cerebellum. Nature. 1991; 351 (6329): 751–4.
  18. Foskett J.K., White C., Cheung K.H., Mak D.O. Inositol trisphosphate receptor Ca2+ release channels. Physiol Rev. 2007; 87: 593-658.
  19. Thrower E.C., Hagar R.E., Ehrlich B.E. Regulation of Ins(1,4,5)P3 receptor isoforms by endogenous modulators. Trends Pharmacol Sci. 2001; 22: 580–6.
  20. Stutzmann G.E., Mattson M.P. Endoplasmic Reticulum Ca2+ handling in excitable cells in health and disease. Pharmacol Rev. 2011; 63: 700–27.