СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТЕЛОМЕРАЗЫ МЕТОДОМ ДВОЙНОЙ АМПЛИФИКАЦИИ ТЕЛОМЕРНЫХ ПОВТОРОВ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

Введение. Теломеразная активность является универсальным маркером для 85% злокачественных опухолей. Это позволяет разрабатывать современные высокочувствительные и высокоспецифичные наборы для диагностики большинства злокачественных новообразований, в том числе на ранних стадиях заболевания. Существующие методы определения активности теломеразы считаются недостаточно эффективными, когда анализируется недостаточное количество клеточного материала. Это делает невозможным проведение неинвазивного варианта диагностики ряда заболеваний, когда количество клеточного материала очень мало. В связи с этим разработка более чувствительных вариантов определения активности теломеразы остается крайне актуальной задачей биологии и медицины. Цель исследования. Разработка высокочувствительного и высокоспецифичного метода определения активности теломеразы в реальном времени. Материал и методы. Предложен новый способ выявления, а также количественного определения активности теломеразы RT-TRAP-2PCR (Real-Time – Telomeric Repeat Amplification Protocol – 2 Polymerase Chain Reaction) в биологических образцах эукариотических организмов методом двойной амплификации теломерных повторов в реальном времени, основанном на измерении суммарного содержания теломерных повторов, новосинтезированных теломеразой в анализируемом образце. Результаты. Данный способ позволяет обеспечить высокую чувствительность и специфичность метода, в том числе при проведении анализа в биологических образцах, характеризующихся низким содержанием теломеразопозитивных клеток и присутствием ингибиторов теломеразы. Метод относится к биологии, медицине, онкологии, ветеринарии, репродуктологии и может быть использован, в частности, для определения активности теломеразы при диагностике злокачественных новообразований, на подготовительных этапах при применении вспомогательных репродуктивных технологий, научных исследованиях. Заключение. Предложенный метод позволяет проводить не только качественный, но и количественный анализ активности теломеразы в образце. Метод дает возможность анализа теломеразной активности в присутствии различных примесей нуклеиновых кислот, белков и других компонентов клеток и тканей, характерных для клинических образцов, при этом для диагностики могут оказаться пригодны образцы, полученные неинвазивными и малоинвазивными способами.