ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ НА АНТИГЕН, ИММОБИЛИЗОВАННЫЙ НА НАНОЧАСТИЦАХ ИЗ СОПОЛИМЕРА ПОЛИМОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ И ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ

DOI: https://doi.org/10.29296/24999490-2019-03-06

Р.Г. Сахабеев(1), Д.С. Поляков(1), кандидат медицинских наук, Н.А. Грудинина(1), кандидат биологических наук, А.А. Вишня(2), А.А. Козловская(3), Е.С. Синицына(4, 5), кандидат химических наук, В.А. Коржиков-Влах(4), кандидат химических наук, доцент, Т.Б. Тенникова(4), доктор химических наук, профессор, М.М. Шавловский1, 6, доктор медицинских наук, профессор 1-ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины» (ФГБНУ «ИЭМ»), Российская Федерация, 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12; 2-ФГБОУ ВО «Российский государственный педагогический университет им. А.И. Герцена», Российская Федерация, 191186, Санкт-Петербург, Набережная реки Мойки, д. 48; 3-ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого», Российская Федерация, 195251, Санкт-Петербург, ул. Политехническая, д. 29; 4-ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Российская Федерация, 199034, Санкт-Петербург, Университетская набережная 7–9; 5-ФГБУН «Институт высокомолекулярных соединений» РАН, Российская Федерация, 199004, Санкт-Петербург, В.О., Большой пр. 31; 6-Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова», Российская Федерация, 191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, 41 E-mail: helm505@mail.ru

Введение. Полимерные нано- и микрочастицы являются перспективным материалом для адресной доставки лекарственных веществ в органы и ткани человека. При этом не изучено влияние данных частиц на гуморальный и клеточный иммунный ответ. Цель исследования. Изучение иммуногенности белка, связанного с полимерными биодеградабельными наночастицами на основе сополимера полимолочной кислоты с полиэтиленгликолем. Методы. Активированные наночастицы были использованы для ковалентного связывания модельного белка. Была осуществлена иммунизация 2 групп мышей: в опытной группе (n=40) животным вводили наночастицы из сополимера полимолочной кислоты и полиэтиленгликоля, которые были ковалентно связаны с модельным белком; в контрольной группе (n=40) мышей иммунизировали смесью того же белка и немодифицированных наночастиц. Проведены 4 иммунизации с интервалами 2 нед. Кровь у мышей брали через 13 дней после каждой иммунизации. Результаты. По данным конфокальной микроскопии, модельный флюоресцирующий белок β2M-sfGFP прочно сорбируется на поверхности наночастиц. Показано, что количество иммобилизованного белка составило 10 мкг на 1 мг наночастиц. Методом иммуноферментного анализа определено содержание специфических антител к модельному антигену в сыворотках мышей. Заключение. С помощью непараметрического статистического критерия Манна–Уитни показано, что на каждом этапе иммунизации содержание антител в контрольной группе достоверно выше, чем в опытной (p

Список литературы: 
  1. Фараонова Т.Е., Оленина Л.В., Колесанова Е.Ф. Возможные клеточные рецепторы вируса гепатита С. Биомедицинская химия. 2008; 54 (2): 154–66. [Faraonova T.E., Olenina L.V., Kolesanova E.F. Vozmozhnye kletochnye receptory virusa gepatita C. Biomedicinskaja himija. 2008; 54 (2): 154–66 (in Russian)]
  2. 2. Myszka D. G., Sweet R. W., Hensley P., Brigham-Burke M., Kwong P. D., Hendrickson W. A., Doyle M. L. Energetics of the HIV gp120-CD4 binding reaction. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2000; 97 (16): 9026–31.
  3. 3. Гурцевич В.Э., Демина Е.А., Сенюта Н.Б., Ботезату И.В., Смирнова К.В., Душенькина Т.Е., Максимович Д.М., Парамонова У.В., Монин И.С., Лихтенштейн А.В.Вирус Эпштейна–Барр у больных классической лимфомой Ходжкина. Клиническая онкогематология. фундаментальные исследования и клиническая практика. 2018; 11 (2): 160–6. [Gurcevich V.Je., Demina E.A., Senjuta N.B., Botezatu I.V., Smirnova K.V., Dushen’kina T.E., Maksimovich D.M., Paramonova U.V., Monin I.S., Lihtenshtejn A.V.Virus Jepshtejna–Barr u bol’nyh klassicheskoj limfomoj Hodzhkina. Klinicheskaja onkogematologija. fundamental’nye issledovanija i klinicheskaja praktika. 2018; 11 (2): 160–6 (in Russian)]
  4. 4. Боровая Т.Г. К вопросу о роли клеточных рецепторов во взаимодействии с вирусами простого герпеса. Морфологические ведомости. 2013; 4: 116–28. [Borovaja T.G. K voprosu o roli kletochnyh receptorov vo vzaimodejstvii s virusami prostogo gerpesa. Morfologicheskie vedomosti. 2013; 4: 116–28 (in Russian)]
  5. 5. Богачек М.В., Зайцев Б.Н., Секацкий С.K., Протопопова Е.В., Терновой В.А., Иванова А.В., Качко А.В., Иванисенко В.А., Дитлер Г., Локтев В.Б. Характеристика С-концевой части гликопротеина Е вируса Западного Нила и оценка силы его взаимодействия с aVß3 интегрином как с предполагаемым клеточным рецептором Биохимия. 2010; 75 (4): 571–81. [Bogachek M.V., Zajcev B.N., Sekackij S.K., Protopopova E.V., Ternovoj V.A., Ivanova A.V., Kachko A.V., Ivanisenko V.A., Ditler G., Loktev V.B. Harakteristika S-koncevoj chasti glikoproteina E virusa Zapadnogo Nila i ocenka sily ego vzaimodejstvija s aVß3 integrinom kak s predpolagaemym kletochnym receptorom Biohimija. 2010; 75 (4): 571–81(in Russian)]
  6. 6. Ne Raux H.L., Flamand A., Blondel D. Interaction of the Rabies Virus P Protein with the LC8 Dynein Light Chain. J. of virology. 2000; 74 (21): 10212–6 https://doi.org/10.1128/JVI.74.21.10212-10216.2000
  7. 7. Calzoni E., Cesaretti A, Polchi A, Di Michele A, Tancini B, Emiliani C. Biocompatible Polymer Nanoparticles for Drug Delivery Applications in Cancer and Neurodegenerative Disorder Therapies. J. Funct Biomater. 2019; 10 (4) https://doi.org/10.3390/jfb10010004.
  8. 8. Solovyov K.V., Polyakov D.S., Grudinina N.A., Egorov V.V., Morozova I.V., Aleynikova T.D. and Shavlovsky M.M.. Expression in E. coli and purification of the fibrillogenic fusion proteins TTR-sfGFP and ß2M-sfGFP. Preparative biochemistry and biotechnology. 2011; 41 (4): 337–49. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21967335
  9. 9. Поляков Д.С., Антимонова О.И., Сахабеев Р.Г., Грудинина Н.А., Ходова А.Е., Синицына Е.С., Коржиков-Влах В.А., Тенникова Т.Б., Шавловский М.М. Влияние наночастиц из полимолочной кислоты на иммуногенность связанного с ними белка. Инфекция и иммунитет. 2017; 7 (2): 123–9. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2017-2-123-129 [Polyakov D.S., Antimonova O.I., Sakhabeev R.G., Grudinina N.A., Khodova A.E., Sinitsyna E.S., Korzhikov-Vlakh V.A., Tennikova T.B., Shavlovsky M.M. Polylactic acid nanoparticles influence on immunogenicity of the protein bound with them. Russian Journal of Infection and Immunity. 2017; 7 (2): 123–9. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2017-2-123-129 (in Russian)]
  10. 10. Поляков Д.С., Грудинина Н.А., Богословская Т.Ю., Соколов А.В., Мандельштам М.Ю., Васильев В.Б. Получение в клетках HEK293 химерного белка, состоящего из рецептора LDL и EGFP; перспективная система для оценки эффектов мутаций в гене LDLR. Цитология. 2017; 59 (12): 881–7. [Poljakov D.S., Grudinina N.A., Bogoslovskaja T.Ju., Sokolov A.V., Mandel’shtam M.Ju., Vasil’ev V.B. Poluchenie v kletkah HEK293 himernogo belka, sostojashhego iz receptora LDL i EGFP; perspektivnaja sistema dlja ocenki jeffektov mutacij v gene LDLR. Citologija. 2017; 59 (12): 881–7 (in Russian)]
  11. 11. Поляков Д.С., Грудинина Н.А., Соловьев К.В., Егоров В.В., Сироткин А.К., Алейникова Т.Д., Тотолян Арег А., Шавловский М.М. Бета-2-микроглобулиновый амилоидоз: фибриллогенез природного и рекомбинантных бета-2-микроглобулинов человека. Медицинский академический журнал. 2010; 10 (2): 40–9. ISSN 1608-4101 http://elibrary.ru/item.asp?id=22969470 [Poljakov D.S., Grudinina N.A., Solov’jov K.V., Egorov V.V., Sirotkin A.K., Alejnikova T.D., Totoljan Areg A., Shavlovskij M.M. Beta-2-mikroglobulinovyj amiloidoz: fibrillogenez prirodnogo i rekombinantnyh beta-2-mikroglobulinov cheloveka. Medicinskij akademicheskij zhurnal. 2010; 10 (2): 40–9. ISSN 1608-4101 http://elibrary.ru/item.asp?id=22969470 (in Russian)]
  12. 12. Поляков Д.С., Сахабеев Р.Г., Шавловский М.М. Частичная денатурация рекомбинантного белка для его аффинного выделения. Прикладная биохимия и микробиология. 2016; 52 (1): 122–7. http://elibrary.ru/item.asp?id=25069770 [Переводная версия статьи: Polyakov D.S., Sakhabeyev R.G., Shavlovsky M.M., Partial Denaturation of Recombinant Protein for Affinity Purification. Prikladnaya Biokhimiya i Mikrobiologiya. 2016; 52 (1): 122–7 (in Russian)]
  13. 13. Kirill V. Solovyov, Anna M. Kern, Natalya A. Grudinina, Tatyana D. Aleynikova, Dmitry S. Polyakov, Irina V. Morozova, Michael M. Shavlovsky. Genetic structures and conditions of their expression, which allow receiving native recombinant proteins with high output. International Journal of biomedicine. 2012; 2 (1): 45–9 http://elibrary.ru/item.asp?id=20245469 http://ijbm.org/articles/2_1_BR1.pdf