ОЦЕНКА ЦИТОКИНОВОГО СОСТАВА СЫВОРОТКИ КРОВИ И ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА

DOI: https://doi.org/10.29296/24999490-2021-03-08

Н.В. Боровкова, М.С. Макаров, Ю.В. Андреев, М.В. Сторожева, И.Н. Пономарев ГБУЗ «Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения города Москвы», Российская Федерация, 129090, Москва, Б. Сухаревская пл., д. 3 Е-mail: mcsimmc@yandex.ru

Введение. Тромбоциты человека потенциально обладают высоким репаративным и регенеративным потенциалом. Биохимический состав препаратов на основе тромбоцитов сильно зависит от способа его получения. Цель исследования. Оценка цитокинового состава тромбоцитарных лизатов, полученных различными способами. Метод. Из консервированной крови доноров-добровольцев получали 5 препаратов: богатую тромбоцитами плазму (БТП), БТП с высоким содержанием лейкоцитов (БТП ВСЛ), бедную тромбоцитами плазму (БеднТП), плазму, выделенную путем пассивной седиментации клеточных компонентов (ППСКК); суспензию тромбоцитов, отмытых от плазмы (СТОП). Кроме того, у доноров забирали неконсервированную кровь для получения сыворотки. Тромбоцитарный лизат готовили путем криодеструкции клеток при -40/-80°С с последующей разморозкой проб при +2/+4°С в течение 12 ч и центрифугированием при 3000 g. Результаты. Показано, что лизаты БТП, БТП ВСЛ, СТОП имеют заметно более высокий уровень ростовых факторов по сравнению с сывороткой. В БеднТП концентрация IL 1alfa, VEGF и TGFα была выше, чем в БТП. На фоне высокой концентрации лейкоцитов в БТП ВСЛ значимо повышался уровень PDGF, а также провоспалительных интерлейкинов IL 6 и IL8, при этом уровень VEGF был снижен по сравнению с БТП. В лизатах ППСКК концентрация VEGF и FGF не отличалась от аналогичных значений в сыворотке и была ниже, чем в БТП и БеднТП. Отмывание тромбоцитов от плазмы увеличивало содержание PDGF, EGF, VEGF, FGF в тромбоцитарном лизате в 2,3–4,9 раза. Выявлена сильная корреляционная связь между уровнем PDGF и EGF и общим содержанием тромбоцитов с гранулами в препаратах до криодеструкции. Общая концентрация тромбоцитов в БТП не коррелировала с концентрацией ни одного из исследованных цитокинов в лизате. Заключение. Факторы роста могут быть получены как в составе БТП, так и БеднТП. Отмывание тромбоцитов от плазмы заметно повышает уровень факторов роста в конечном лизате.
Ключевые слова: 
тромбоциты, гранулы, цитокины, факторы роста

Список литературы: 
  1. Mehta S., Watson J.T. Platelet rich concentrate: basic science and current clinical applications. J Orthop Trauma. 2008; 22 (6): 432–8. DOI: 10.1097/BOT.0b013e31817e793f.
  2. Golebiewska E.M., Poole A.W. Secrets of platelet exocytosis – what do we really know about platelet secretion mechanisms? Br J Haematol. 2014; 165 (2): 204–16. DOI: 10.1111/bjh.12682.
  3. Nurden A.T., Nurden P., Sanchez M., Andia I., Anitua E. Platelets and wound healing. Front Biosci. 2008; 13 (9): P. 3532–48.
  4. Marx R.E. Platelet-rich plasma: evidence to support its use. J Oral Maxillofac Surg. 2004; 62 (4): 489–96. DOI: 10.1016/j.joms.2003.12.003.
  5. Alsousou J., Thompson M., Hulley P., Noble A., Willett K. The biology of platelet-rich plasma and its application in trauma and orthopaedic surgery: a review of the literature. J Bone Joint Surg Br. 2009; 91 (8): 987–96. DOI: 10.1302/0301-620X.91B8.22546.
  6. Chellini F., Tani A., Zecchi-Orlandini S., Sassoli C. Influence of Platelet-Rich and Platelet-Poor Plasma on Endogenous Mechanisms of Skeletal Muscle Repair/Regeneration. Int J. Mol Sci. 2019; 20 (3): 683. DOI: 10.3390/ijms20030683.
  7. Amable P.R., Carias R.B., Teixeira M.V., da Cruz Pacheco I., Correa do Amaral R.J., Granjeiro J.M., Borojevic R. Platelet-rich plasma preparation for regenerative medicine:optimization and quantification of cytokines and growth factors. Stem Cell Res Ther. 2013; 4 (3): 67. DOI: 10.1186/scrt218.
  8. Макаров М.С., Хватов В.Б., Высочин И.В., Кобзева Е.Н., Боровкова Н.В. Морфофункциональный анализ тромбоцитов человека с помощью витального окрашивания. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2014; 156 (3): 409–12. [Makarov M.S., Kobzeva E.N., Vysochin I.V., Borovkova N.V., Khvatov V.B. Morphofunctional analysis of human platelets by vital staining. Bull Exp Biol Med. 2014; 156 (3): 409–12. DOI: 10.1007/s10517-014-2360 (in Russian)]
  9. Kamykowski J., Carlton P., Sehgal S., Storrie B. Quantitative immunofluorescence mapping reveals little functional coclustering of proteins within platelet alpha-granules. Blood. 2011; 118 (5): 1370–3. DOI: 10.1182/blood-2011-01-330910.
  10. Shahidi M., Vatanmakanian M., Arami M.K., Sadeghi Shirazi F., Esmaeili N., Hydarporian S., Jafari S. A comparative study between platelet-rich plasma and platelet-poor plasma effects on angiogenesis. Med Mol Morphol. 2018; 51 (1): 21–31. DOI: 10.1007/s00795-017-0168-5.
  11. Конторщикова К.Н., Шахова К.А., Янченко О.С., Тихомирова Ю.Р., Булат В.В., Булат А.В. Определение тромбоцитарных факторов роста в необогащенной тромбоцитами плазме. Медицинский альманах. 2018; 53 (2): 41–4. [Kontorschikova K.N., Shakhova K.A., Yanchenko O.S., Tikhomirova Y.R., Bulat V.V., Bulat A.V. Determination of platelet-derived growth factors in platelet unenriched plasma. Medical Almanac. 2018; 53 (2): 41–4 (in Russian)]
  12. Макаров М.С., Боровкова Н.В., Хватов В.Б., Кобзева Е.Н. Влияние центрифугирования на биологическую полноценность тромбоцитов человека. Вестник службы крови России. 2015; 1: 41–4. [Makarov M.S., Borovkova N.V., Khvatov V.B., Kobzeva E.N. Effect of centrifugation on the biological value of human platelets. Vestnik sluzby krovi Rossii. 2015; 1: 41–4 (in Russian)]
  13. Melzer M. Lysosomes, growth factor activity, and carcinogenic implications. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 2012; 22 (4): 345–58. DOI: 10.1615/critreveukargeneexpr.v22.i4.70.
  14. Kreuter J., Gelperina S. Use of nanoparticles for cerebral cancer. Tumori. 2008; 94: 271–7.
  15. Сергеева Н.С., Шанский Я.Д., Свиридова И.К., Кирсанова В.А., Ахмедова С.А., Кувшинова Е.А., Мейснер И.С. Биологические эффекты тромбоцитарного лизата при добавлении в среду культивирования клеток человека. Гены и клетки. 2014; 9 (1): 77–85. [Sergeeva N.S., Shanskiy Y.D., Sviridova I.K., Kirsanova V.A., Ahmedova S.A. Kuvshinova E.A., Meisner I.S. Biological effects of platelet lysate added to cultural medium of human cells. Gens and cells. 2014; 9 (1): 77–85 (in Russian)]
  16. Шанский Я.Д., Сергеева Н.С., Свиридова И.К., Киракозов М.С., Кирсанова В.А., Ахмедова С.А., Антохин А.И., Чиссов В.И. Исследование лизата тромбоцитов человека как перспективной ростовой добавки для культивирования стволовых и других типов клеток. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2013; 156 (1): 146–51 [Shanskii Y.D., Sergeeva N.S., Sviridova I.K., Kirakozov M.S., Kirsanova V.A., Akhmedova S.A., Antokhin A.I., Chissov V.I. Human platelet lysate as a promising growth-stimulating additive for culturing of stem cells and other cell types. Bull Exp Biol Med. 2013; 156 (1): 146–51. DOI: 10.1007/s10517-013-2298-7 (in Russian)]